Šta znači pcr metoda. PCR dijagnostika - analiza na infekcije

Savremene metode dijagnostika bolesti se stalno unapređuje i dopunjuje novim načinima dobijanja informacija o zdravstvenom stanju pacijenata. PCR analiza je prepoznata kao jedan od najpreciznijih i najpouzdanijih medicinskih testova. Ovuda laboratorijska istraživanja patentiran je 1983. godine, a njegov tvorac, Kary Mullis, dobio je Nobelovu nagradu za svoje otkriće.

Za šta se koristi PCR?

Šta je PCR? Lančana reakcija polimeraze je specifična studija koju koriste liječnici širom svijeta. Mikrobiologija ima obilje podataka o strukturi virusa i bakterija koji su uzročnici teških bolesti. Kao studija koristi se PCR RNA virusa, HSV antitijela itd. PCR test krvi pomaže u identifikaciji do 12 različitih bolesti.

Svaka studija se može provesti zasebno kliničke indikacije. Postoji i sveobuhvatan pregled, poznat kao "PCR-12". U tom slučaju se provodi preventivna analiza za svaku bolest koju PCR može otkriti.

• HCV RNA i druge vrste hepatitisa
• Definicija spolno prenosivih bolesti (klamidija, ureplazmoza, papiloma itd.)
• Infektivna mononukleoza (Epstein-Barr virus)
• Herpes
• Onkovirusi (tumorski virusi koji uzrokuju rak)
• CMVI (test na citomegalovirus)
• Listerioza
• Encefalitis
• Tuberkuloza
• kandidijaza (droz)
• Helicobacter pylori infekcija (dovodi do želučanih problema)

Ponekad medicinske ustanove provode takozvani skrining, selektivnu studiju koja je usmjerena na geografsko područje ili gradsku četvrt. Mnogi od ovih skrininga sprečavaju izbijanje virusa. PCR i analizator bolesti koriste se za otkrivanje zaraznih vrsta bolesti, kao što je virusni hepatitis.

Možete se testirati samoinicijativno tako što ćete kontaktirati lokalnog terapeuta za uputnicu. Detekcija virusne DNK za PCR nije problem. Negativan rezultat testa može smiriti čak i sumnjivog pacijenta.

Karakteristike analize

Krv za PCR možete donirati u okružnoj klinici ili privatnoj laboratoriji. Da biste odabrali gdje ćete uraditi analizu, obratite pažnju na tehničku opremljenost zdravstvene ustanove. Stara oprema može značajno smanjiti pouzdanost analize. Visok kvalitet istraživanja, po pravilu, može garantovati samo komercijalna institucija opremljena savremenom laboratorijskom opremom.

Kvalitativna PCR analiza je brža i jeftinija od kvantitativne. Međutim, gotovi rezultat kvantitativnog testa daje doktoru više informacija u slučaju da je pacijent zaražen. Bilo koja vrsta ove studije može otkriti prisustvo bolesti.

PCR tokom latentnog toka bolesti može otkriti virus, čak iu odsustvu očiglednih kliničkih simptoma i pritužbi pacijenta.

Istraživanje se provodi u medicinskom laboratoriju. Kao hemijski reagens koriste se posebni enzimi koji su u stanju da povećaju DNK i RNK strukture biološkog uzorka pacijenta. Ova metoda omogućava laboratorijskom asistentu da vizualno utvrdi prisustvo štetnih ćelija. Dobiveni podaci se provjeravaju u bazi podataka infektivnih agenasa i bolest se identificira. Također je moguće izračunati kvantitativni omjer patogena.

Nakon polaganja biološkog uzorka, laboratorijski asistent će naznačiti vrijeme testiranja i za koliko dana će biti moguće dobiti rezultat. Trajanje studije ovisi o vrsti infekcije i može trajati 1 dan ili do 5 dana. Spremnost rezultata studije ovisi o opremi i opterećenju laboratorije. PCR analizu i interpretaciju rezultata treba da obavljaju kvalifikovani medicinski stručnjaci.

Biomaterijal za istraživanje

Da biste razumjeli kako se uzima PCR analiza, trebali biste znati kakvu vrstu biološkog materijala treba proučavati. Najčešći način za provođenje analize je test krvi iz vene. U većini slučajeva na analizu krvi ne utiču vanjski faktori kao što su prehrana ili dnevna rutina. Međutim, mnogi liječnici preporučuju da se tijelo ne preopterećuje i da se uzorak krvi uzima na prazan želudac. Antibakterijski lijekovi mogu iskriviti rezultat studije.

PCR dijagnoza infekcija u ginekologiji provodi se, u pravilu, putem brisa s površine sluznice. Kako se uzima uzorak? Bris uzima ljekar koji prisustvuje nakon pregleda. Bris se stavlja u posebnu posudu i prenosi u laboratoriju. Za žene postoje sljedeće indikacije za analizu brisa: uzrok neplodnosti, komplikacije tokom trudnoće, akutni oblik spolno prenosivih bolesti.

Za analizu urina i fecesa koriste se posebne sterilne posude s poklopcem. Osim toga, nije potrebno brisati ili prati kupljene posude radi analize. Tokom uzimanja uzoraka, nemojte dodirivati ​​unutrašnje zidove posude rukama ili stranim predmetima. Dodatna sredstva (klistire i sl.) se ne preporučuju. Materijal ne bi trebao sadržavati strane tvari, pa se preporučuje prestanak upotrebe supozitorija, laksativa i diuretika tjedan dana prije testa. Analiza se provodi u roku od 4-5 sati i omogućava vam da identificirate patogene mikroorganizme. Visoka tačnost studije omogućava otkrivanje čak i jedne patogene ćelije u biološkom uzorku pacijenta.

Kako uzeti analizu

Test krvi za PCR se uzima iz vene, u laboratorijskim uslovima, striktno na prazan želudac. Isporuka drugog biomaterijala vrši se u laboratoriji, ordinaciji liječnika ili kod kuće. Gdje uzeti uzorak za analizu, liječnik će vam reći prilikom upućivanja. Prije predaje biološkog uzorka neophodna je priprema pacijenta. Opšti zahtjev je odsustvo fizičkog i psiho-emocionalnog stresa na tijelo 2-3 dana prije testa. Liječnik će vam reći kako pravilno uzeti PCR testove.

Priprema za PCR test krvi uključuje izbjegavanje alkohola 48 sati prije uzimanja uzorka. Krv se uzima na prazan želudac, a prije testa dozvoljeno je piti samo čistu vodu.

Ako se istovremeno provodi biohemijska studija, tada su pravila za pripremu za studiju stroža.

Mnoge pacijentkinje zanima pitanje da li je moguće napraviti testove tokom menstruacije? Zavisi od biološkog uzorka. Po završetku menstruacije potrebno je uzeti ginekološki bris i analizu urina. Za krv, pljuvačku i druge uzorke menstrualnog ciklusažene nisu pogođene.

Analizu urina i fecesa treba uzeti kod kuće, donirani materijal se dostavlja u laboratoriju u posebnom kontejneru. Prije prenošenja PCR izmeta, trebali biste prestati uzimati lijekove koji utiču na boju izmeta. Dan prije predaje materijala preporučuje se isključiti seksualni kontakt, antibakterijski lijekovi prestanite sa uzimanjem 2-3 sedmice prije testa. Urin se izlučuje na prazan želudac.

Rezultat istraživanja

Vaš ljekar može naručiti kvalitativni ili kvantitativni laboratorijski test. Šta pokazuje analiza? Ova vrsta laboratorijske studije koristi se za dijagnosticiranje zaraznih i virusnih bolesti. Rezultat omogućava doktoru da utvrdi da li je osoba bolesna ili zdrava. PCR rezultati su vrlo precizni i specifični. U većini slučajeva radi se o jednostavnom negativnom ili pozitivnom odgovoru, koji je razumljiv i osobi bez medicinskog obrazovanja. Ali postoje neke karakteristike dekodiranja rezultata.

• PCR negativan znači da u ispitivanom materijalu nisu pronađeni tragovi bolesti.
• Kvalitativni PCR pokazuje prisustvo ili odsustvo virusa u biomaterijalu, ali ne i njihov broj.
• Rezultat kvantitativne studije daje informacije o broju virusa prisutnih u tijelu. Istim testom se utvrđuje faza bolesti (hronična, akutna, akutna).

Tumačenje rezultata vrši ljekar koji prisustvuje. U nekim slučajevima pozitivna reakcija ne znači da je pacijent bolestan. Moguće je i "zdravo" prenošenje virusa. Dobivanje lažno negativnog rezultata moguće je ako je infekcija već ušla u tijelo, ali još nije započela aktivnu infekciju. U 5% slučajeva rezultat analize je pogrešan zbog pacijentovog nepoštivanja preporuka za pripremu za studiju ili pogrešnih radnji zaposlenika laboratorije.

Prednosti metode

PCR je najsavremenija i najpreciznija dijagnostička metoda danas dostupna. Cijena istraživanja je prilično visoka. Velike laboratorije po pravilu daju popust za sveobuhvatno ispitivanje.

Na primjer, "PCR-12" za proučavanje 12 različitih parametara koštat će manje od analize za svaki od parametara posebno.

Analiza ima niz neospornih prednosti u odnosu na druge dijagnostičke metode:

• Određivanje jedinstvenog dijela RNA lanca infekcije omogućava vam da precizno identificirate uzročnika bolesti.
• Univerzalna metoda provođenja studije omogućava identifikaciju nekoliko bolesti odjednom u jednom biološkom uzorku pacijenta.
• PCR testom se može utvrditi prisutnost bolesti i prije pojave kliničkih simptoma i tegoba kod pacijenta, što omogućava da se liječenje počne što je prije moguće.
• Metoda je vrlo osjetljiva. Test otkriva čak i pojedinačne ćelije patogena.
• Kontinuirano unapređenje u obradi bioloških uzoraka iz godine u godinu poboljšava kvalitet istraživanja.

Analiza za PCR ili lančanu reakciju polimerazom obično se propisuje kada se otkriju simptomi bolesti ili nakon kontakta s bolesnom osobom. Ovaj test može pokazati prisustvo virusa čak i kada nema simptoma bolesti. Bilo koja osoba, koja se obratila terapeutu, može proći ovu jednostavnu i pouzdanu analizu. Tumačenje PCR analize vrši kvalifikovani lekar. Potvrda o odsustvu bolesti može važiti nekoliko sedmica ili mjeseci, ovisno o vrsti infekcije.

U kontaktu sa

Po prvi put se o PCR analizi raspravljalo 1983. godine. Ovu tehniku ​​su razvili Cary Mullis i njegovo laboratorijsko osoblje. Od tada je popularnost studije stalno rasla, jer. Ima značajan broj prednosti u odnosu na druge metode.

Do danas je PCR dijagnostika mjerilo ili standard u otkrivanju infekcija i patogena, posebno onih koji su asimptomatski. Prije svega, to je pretklinička dijagnostika.

Izvođenje analize u PCR mašini

Suština PCR analize leži u činjenici da se u epruveti kloniraju (višestruko uvećane) sekvence nukleinskih kiselina (DNK ili RNK) karakteristične za određenu vrstu patogena.

Skraćenica PCR označava lančanu reakciju polimeraze.

Dom razlikovna karakteristika ove metode je amplifikacija, tj. kreacija ogroman broj kopije potrebnog gena ili njegovog fragmenta. Sve se to proizvodi izvan tijela, tj. in vitro.

Dakle, ako se provede 20 PCR ciklusa, onda se dobije približno 1 milion kopija ili više. To omogućava otkrivanje infekcije čak i sa njenom malom količinom u izvornom materijalu, kada su druge metode analize nemoćne. To određuje visoku osjetljivost ove metode.

Jednostavnim riječima, možete povući takvu analogiju - nećete primijetiti jedno malo zrno pijeska na podu, ali nakon povećanja broja zrna pijeska za milion puta (PCR), gomila pijeska će već biti jasno vidljiva .

Glavne prednosti analize na infekcije PCR metodom su:

• najveća osetljivost i specifičnost u poređenju sa drugim metodama koje se koriste za otkrivanje infektivnih agenasa;
• sposobnost otkrivanja mikroorganizama u raznim biološkim materijalima (krv, urin, vaginalni sekret, pljuvačka, itd.);
• sposobnost istovremenog identificiranja nekoliko uzročnika mikroorganizama, ako ih ima. Poređenja radi, upotreba bakterioloških metoda ne pruža takvu mogućnost, jer. potrebno je koristiti različite podloge za uzgoj različitih patogenih mikroba;
• mogućnost transporta biološkog materijala, jer za identifikaciju patogena nije potrebno održavati ga živim;
• brzina analize;
• tačnost etiološke dijagnoze;
• mogućnost kvantitativnog određivanja patogena - posebno važno za oportunističke mikrobe, koji tek nakon postizanja određene koncentracije mogu izazvati bolest;
• sposobnost kontrole tijeka infektivnog procesa tokom liječenja.

PCR analiza za infekcije

Trenutno, metoda lančane reakcije polimeraze određuje većinu seksualnih (i drugih) zaraznih bolesti. Dijagnostika je postala široko rasprostranjena zbog svoje visoke osjetljivosti i specifičnosti.

Posebno je popularna PCR analiza na klamidiju.

To je zbog činjenice da ovi mikroorganizmi žive intracelularno, što stvara određene poteškoće u njihovom otkrivanju.

PCR dijagnostika omogućava otkrivanje čak i minimalne količine klamidije, koje u pravilu još ne dovode do pojave kliničkih simptoma. Čak i prisustvo samo 2 molekula nukleinske kiseline u test materijalu omogućava identifikaciju uzročnika infekcije.

A to je ključ uspješnog liječenja, koje počinje u pretkliničkoj fazi.

Infekcije su takođe identifikovane:

• virusni hepatitis;
• tuberkuloza;
• krpeljni encefalitis;
• razne venerične bolesti itd.

PCR dijagnostika omogućava rješavanje niza drugih važnih zadataka:

• praćenje terapije i evaluacija njene efikasnosti;
• određivanje "opterećenja virusima", na osnovu čega se vrši individualni odabir doze lijeka;
• identifikacija sojeva mikroorganizama koji su farmakološki otporni (neosjetljivost na lijekove).

Priprema za dostavu analize

Nije potrebna namjerna priprema za isporuku analize, koju će obaviti PCR. Međutim, veoma je važno da specijalista uzme materijal u skladu sa svim potrebnim uslovima steriliteta.

Tako, na primjer, treba koristiti posebne vakuum sisteme za vađenje krvi, posebne epruvete za uzimanje tajne genitalnih organa itd.

U nekim slučajevima materijal se mora transportovati u laboratoriju. Da biste to učinili ispravno, potrebno je hermetički zatvoriti posudu s biološkim materijalom. To će spriječiti prodor drugih mikroorganizama koji žive u vanjskom okruženju.

Rezultati PCR analize mogu biti na dvije opcije:

• pozitivno - otkriven je patogen;
• negativan - uzročnik nije otkriven.

Trebali biste znati - čak i ako nema kliničkih simptoma, može se dobiti pozitivan rezultat.

U ovom slučaju, potrebno je fokusirati se na podatke polimerazne reakcije, jer omogućava identifikaciju bolesti u pretkliničkoj fazi.

Ponekad se može dobiti sumnjiv odgovor kada broj identificiranih kopija odgovara gornjoj granici norme. Da bi se razjasnio uzrok bolesti, analizu treba ponoviti, obraćajući posebnu pažnju na uslove za prikupljanje biološkog materijala.

Koliko je tačna PCR dijagnostika?

Glavne prednosti PCR dijagnostike mogu se formulirati u obliku nekoliko teza:

• mogućnost dobivanja ogromnog broja kopija patogenih mikroorganizama;
• veliki broj kopija je ključ uspješnog sekvenciranja (detekcije).

Ovo omogućava PCR analizu visoke preciznosti za detekciju intracelularnih patogena i spororastućih mikroorganizama.

Stoga je metoda posebno informativna za otkrivanje mikobakterije tuberkuloze i drugih sličnih infektivnih agenasa. Ima najveću tačnost i ne treba ponovo provjeravati dobijene rezultate (osim u kazuističkim slučajevima).

Da bi se dobili najpouzdaniji rezultati, moraju biti ispunjena dva glavna uslova koji sprečavaju egzogenu (vanjsku) infekciju:

• ispravan unos materijala;
• ispravan transport.

PCR dijagnostika(lančana reakcija polimeraze) koristi se za otkrivanje aktivnog stadijuma bolesti u kombinaciji sa već tradicionalnim studijama, kada nema reakcije imunološkim i mikrobiološkim dijagnostičkim metodama.

U određenom periodu PCR dijagnostika je korišćena samo u naučne svrhe, a tek od kraja 20. veka i početka 21. veka ova analiza je postala svojevrsni „zlatni standard“, koji je od velike koristi u raznim oblastima. medicine.

Šta je suština PCR dijagnostike?

PCR dijagnostika, za razliku od one koja može otkriti tragove antitijela (AT), utvrđuje ne samo osnovne uzroke patološkog stanja, već i otkriva prisutnost DNK ili RNK na određenom specifičnom mjestu pomoću enzima u laboratoriji.

PCR analiza je veoma precizna, eliminiše mogućnost lažnih reakcija i nije potrebno vađenje krvi iz vene za pregled, dovoljan je mali broj uzoraka tkiva, dovoljna je biološka tečnost.

Gore navedenoj varijanti biološkog okruženja materijala za testiranje koji sadrži navodni infektivni agens, odlukom liječnika može se dodijeliti nekoliko opcija odjednom, uključujući ovo:

• razmazati(iscjedak iz genitalija);
• struganje sa sluzokože(usta, nos, genitalije);
• pljuvačke, sputum ili pleuralna tečnost;
• sok od prostate, proučavanje sekrecije prostate na prisustvo štetočina;
• placentnog tkiva ili amnionska tečnost;
• opšta analiza urina proučiti sediment (nakon centrifugiranja), ako je potrebno, za otkrivanje Mycobacterium tuberculosis;
• cerebrospinalnu tečnost za otkrivanje infektivnih lezija centralnog nervnog sistema;
• prikupljanje ćelija ili tkiva(biopsija) iz jetre, duodenuma, želuca itd.

Ovi uzorci se stavljaju u poseban reaktor i analiziraju višestrukim udvostručavanjem (amplifikacijom) proučavanih fragmenata DNK, ponovljenim ciklusima replikacije i denaturacije uz dodavanje specifičnih enzima za sintezu. Prema vrsti lančane reakcije, ovom metodom se identifikuju tip i individualne karakteristike DNK ili RNK. Na kraju, PCR proces komparativna analiza klonirani genetski materijal omogućuje vam da identificirate čak i pojedinačne ćelije živog virusa, lako razlikuju ureaplazmu od mikoplazme ili.

Prednosti i nedostaci PCR dijagnostike

Ova PCR dijagnostika ima i prednosti i nekoliko nedostataka.

Prednosti dijagnostike:

• definicija patogena daje direktnu indikaciju prisutnosti u genetskom materijalu atipičnog dijela DNK ili RNK;
• PCR dijagnostika daje 100% tačnost zbog prisustva u test materijalu čestica nukleinske kiseline (fragmenata DNK ili RNK) karakterističnih samo za određeni virus ili bakteriju;
• visoka osjetljivost PCR sistema, u poređenju sa drugim dijagnostičkim metodama. PCR analiza za utvrđivanje prisustva patogena dovoljna je za jednu ćeliju živog virusa (10-100 ćelija u uzorku), što omogućava otkrivanje patogenog mikroorganizma u ranoj fazi bolesti u odsustvu teških simptoma , iu naprednim oblicima;
• visokotehnološka automatizirana PCR amplifikacija povećava brzinu analize testiranjem na dan uzorkovanja (odvajajući ne više od 4-6 sati za dijagnozu). Ovo povećava produktivnost i daje prednost u odnosu na metode istraživanja kulture;
• Svestranost analize omogućava korištenje uzetog genetskog materijala DNK ili RNK razne opcije, za otkrivanje nekoliko patogena iz jednog biološkog uzorka.

Govoreći o nedostacima, dakle, s obzirom na osjetljivost PCR sistema, jedan od neugodnih momenata je:

• varijabilnost mikroorganizama. Nedostatak je što je mutacija svojstvena mikroorganizmima, što dovodi do promjene proučavanog genotipa patogena. A PCR test sistem u amplificiranom području genoma ne može uhvatiti hibrid već evoluirajućeg patogena, kao što ga ljudski imuni sistem ne prepoznaje, pa neće biti reakcije na utvrđivanje prisustva zarazne bolesti. Ali za to su u toku različiti razvoji kako bi se poboljšala PCR metoda;
• mogućnost dobijanja lažno pozitivnog ili lažno negativnog rezultata. Kako ne biste naišli na lažne rezultate u jednoj od faza PCR dijagnostike, mora se provesti pažljivo, bez kršenja procesa, poštujući pravila za uzimanje materijala. Uzorci mogu promijeniti svoju strukturu ili se čak pokvariti, što može dovesti do lažno negativnog ili lažno pozitivnog rezultata. Treba shvatiti da takav rezultat može biti kada je infekcija već ubijena, ali mrtve ćelije nisu imale vremena da se obnove i uzete su u obzir prilikom kloniranja. Stoga, na ranih datuma nakon tretmana koriste se druge metode (npr.), a nakon potpune eliminacije neaktivnih patogena iz organizma, vrši se analiza-kontrola PCR-om. I već ljekar koji prisustvuje prihvata konačna odluka o prikladnosti terapije, uzimajući u obzir sve argumente "za" i "protiv".

Priprema za PCR dijagnostiku i uslovi za testiranje

Vrijedno je obratiti pažnju na jednostavnu pripremu za PCR, za to je potrebno striktno slijediti sve preporuke liječnika i pridržavati se barem nekoliko neospornih uvjeta za tačniji rezultat.

Ovisno o metodi uzorkovanja materijala za ispitivanje, treba imati na umu da:

• za dijagnostiku venske krvi pacijent mora biti testiran na prazan želudac, isključujući čak i upotrebu tekućine;
• dati bris potrebno je suzdržati se od seksualnog kontakta najmanje par dana, higijena genitalnih organa je dozvoljena uveče, ali ne na dan testa. Vrijedno je odabrati optimalno vrijeme za studiju, uzimajući u obzir: dva dana prije ili nakon menstrualnog ciklusa;
• za bilo koju metodu uzorkovanja treba prestati sa upotrebom antibakterijskih sredstava par sedmica prije porođaja lijekovi, nakon što ste se prethodno konsultovali sa svojim lekarom, jer to može uticati na pouzdanost rezultata;
• za analizu urina da bi se utvrdilo prisustvo patogena, potrebno je ne samo poštivati ​​sterilnost i higijenu, već i kvalitet prikupljeni materijal radi preciznijeg istraživanja. Stoga je prihvatljivo sačekati 2-3 sata od posljednjeg mokrenja do uzimanja mokraće, ili koristiti jutarnji uzorak, što daje veću vjerovatnoću da se pokaže prisustvo upalnog procesa.

Upotreba PCR-a i otkrivene bolesti

Za traženje uzročnika mnogih bolesti ne treba zanemariti gore navedene preporuke, a propisani pregled liječnika PCR dijagnostičkom metodom može zaštititi ne samo odraslu osobu, već i malo, nerođeno dijete u maternici od ozbiljnih komplikacija. .

Naime, upravo ženska polovina populacije najčešće boluje od određenih vrsta virusa (HPV), što značajno povećava mogućnost raka grlića materice ili neplodnosti. A s obzirom na mogući negativan utjecaj na tok trudnoće i na razvoj fetusa, treba imati na umu da je različite skupine mikroorganizama koje se prenose spolnim putem ili s imunodeficijencijom teško pripisati jednoj ili drugoj skupini patogena. , budući da su vrlo međusobno povezane (na primjer, TORCH infekcije i SPI). Ali lančana reakcija polimeraze može pronaći stranu strukturu određivanjem specifične vrste virusne DNK u ženskom tijelu.

Dešifriranje rezultata analize omogućava vam da potvrdite ili opovrgnete prisutnost bolesti. Pokrivajući širok spektar patogena, ovakva analiza je vrlo relevantna za pravovremeno otkrivanje mnogih infekcija, kao što su:

• otkrivanje HIV infekcije. Teško oštećenje imuniteta infekcijom koja prvenstveno pogađa imunokompetentne ćelije prisutne na površini imunog sistema na CD4 receptorima, koje potom gube sposobnost odbrane od infekcija i prestaju da reaguju na prisustvo RNK virusa u krvnoj plazmi. Kada pozitivan rezultat uz anonimni pregled, ponavlja se uz dodatak dodatnih studija;
• virusni hepatitis, najčešće hepatitis C(sadrži RNA patogen), koji je zbog lake podnošljivosti teško dijagnosticirati drugim metodama, jer je PCR metoda optimalnija za prepoznavanje patogena u krvi ili biopsiji jetre. manifestira se u kasnoj fazi, formirajući maligni upalni proces. Međutim, vrijedi uzeti u obzir da ako je rezultat pozitivan tokom testa na prisustvo antitijela u krvi (AT), a PCR test daje negativan rezultat, to može ukazivati ​​na prisustvo virusa u tijelu u vrlo mala količina, ili su zahvaćene ćelije u fazi čekanja u genomu ćelija jetre bez pristupa krvotoku. U takvim slučajevima će se provesti niz ponovljenih studija za konačnu dijagnozu i metode liječenja;
• onkogenih virusa kao što je HPV(humani papiloma virus) sa više od 100 različitih tipova virusa, spolno prenosivih ili tokom medicinskih zahvata, novorođenče se inficira porođajnim kanalom od majke ako je nosilac infekcije papiloma virusom;
• STI(seksualno prenosive infekcije);
• pogodan za otkrivanje svih spolno prenosivih bolesti(, gardnereloza,) i TORCH infekcije;
• pokazuje sa visokim stepenom tačnosti imaju infekciju mononukleozom, karakterizirana oštećenjem limfnog i retikuloendotelnog sistema (uvećani limfni čvorovi, slezina, jetra), može se otkriti PCR dijagnostikom, uzimajući krvni serum kao materijal za ispitivanje. Prema vanjskim parametrima, Filatovljeva bolest se može manifestirati kao osip, žuč na koži, bijeli premaz na jeziku.
• , prodiranje u krv oboljelih od AIDS-a i transplantiranih organa uz upotrebu lijekova za suzbijanje imunološkog sistema;
• herpetična infekcija, koji predstavlja jednu ili drugu vrstu herpesa koji može zahvatiti genitalije, sluznicu očiju ili kožu;
• tuberkuloza. U prisustvu glavnih simptoma bolesti, nakon rezultata bronhoskopije propisuje se PCR analiza, što vam omogućava da dijagnosticirate aktivnu fazu tuberkuloze mnogo brže nego upotrebom bakteriološke ili bakterioskopske metode;
• virusne zarazne bolesti kao npr krpeljni encefalitis(Borelioza). Karakterizira ga oštećenje ćelija nervni sistem, intoksikacija, upala mozga i potom razvoj paralize. Za otkrivanje antigena pomoću PCR dijagnostike, uzimaju se krv i likvor kako bi se izolirao RNA virus.
• otkrivanje infekcije Helicobacter pylori(dovode do hroničnog gastritisa, peptičkog ulkusa, tumora želuca) PCR dijagnostikom omogućava detekciju Helicobacter pylori DNK (genetski materijal) u biopsiji, fecesu, pljuvački, razlikovanje sojeva prema stepenu maligniteta.

PCR dijagnostika infekcija razvija se ubrzanim tempom i uspješno se koristi u onkologiji, ginekologiji, urologiji, gastroenterologiji, virologiji, a lista se stalno ažurira, ali nije ograničena na potragu za uzročnicima zaraznih bolesti. Između ostalih praktične primjene PCR metoda također može istaći korištenje istraživanja za utvrđivanje očinstva i identifikaciju osobe.

Ova tehnika je poznata po svojoj preciznosti i svestranosti. PCR ispitivanjem u jednom uzorku može se istovremeno otkriti više vrsta štetnih mikroorganizama. Za takve događaje mogu se koristiti različiti biomaterijali: pljuvačka, urin, krv, pleuralna tekućina itd.

S druge strane, ova dijagnoza zahtijeva savremenu opremu i adekvatno obučeno osoblje. Prilikom odabira medicinske ustanove, bolje je fokusirati se na velike ustanove koje sebi mogu priuštiti kupovinu najnovijih uređaja. Ovo će direktno uticati na brzinu dekodiranja analize i njenu tačnost.

Šta je PCR analiza?

Cijeli skup genetskih informacija koje svaki živi organizam ima sadržan je u DNK. Navedena nukleinska kiselina sastoji se od četiri jedinjenja. Nije teško identificirati živo biće: svako od njih, bez obzira na parametre (bilo da je u pitanju bakterija, životinja, riba), ima svoj jedinstveni DNK.

Neki mikroorganizmi pohranjuju svoje genetske informacije u RNK.

Fragmenti obje nukleinske kiseline (RNA i DNK) mogu se otkriti lančanom reakcijom polimeraze, koja se također naziva PCR.

U srcu razmatranog testiranja - upotreba posebnih enzima, zahvaljujući kojoj se kopiraju neki dijelovi DNK/RNA virusnih, mikrobnih i drugih infekcija.

Izvor ovih patogena može biti praktično bilo koji biološki materijal uzeti od osobe: pljuvačka, krv, urin, iscjedak iz uretre ili vagine itd.

Budući da je sadržaj nukleinskih kiselina u uzorcima krvi i drugim biološkim materijalima vrlo nizak, drugim metodama istraživanja nemoguće je identificirati određenu bolest. AT tokom PCR-a moguće je postići povećanje nivoa DNK molekulašto omogućava pouzdanu dijagnozu u budućnosti.

Laboratorijski tehničari koriste posebnu opremu za obavljanje analize. biciklista . Ovaj uređaj zagrijava i hladi epruvete u koje se nalazi biomaterijal. Odgovarajući temperaturni uslovi direktno utiču na tačnost dobijenih rezultata.

Kao rezultat, PCR laboratorijski asistenti primaju elektroforegram, na kojoj su fiksirani fragmenti izolovanih nukleinskih kiselina.

Navedena slika se upoređuje sa bazom podataka na računaru - i tako se utvrđuje vrsta patogena, njegova koncentracija u organizmu.

Koje se bolesti mogu identifikovati?

Analizom koja se razmatra mogu se identificirati sljedeće patologije:

Do danas se ovom testiranju vrlo često pribjegava. kriminolozi kada je potrebno utvrditi ko je vlasnik biološkog materijala uzetog sa mjesta zločina.

Lančana reakcija polimeraze se također može koristiti za određivanje očinstvo.

Pravila prikupljanja materijala za istraživanje

Da bi se dobio što precizniji rezultat, biouzorci za PCR uzimaju se na sljedeći način:

1. Alati, posude za oduzeti materijal moraju biti dezinfikovani. Bolje je koristiti uređaje za jednokratnu upotrebu.
2. Prikupljene uzorke krvi treba staviti u epruvete koje sadrže antikoagulanse. I u procesu uzorkovanja, oni se okreću posebnim vakuum sistemima.
3. Uzorkovanje bilo kojeg biomaterijala mora se obaviti u prostoriji za manipulaciju.

Za dijagnozu se mogu koristiti različiti materijali: sve će ovisiti o vrsti infekcije:

• Brisevi/struganje grlića materice/uretre, jutarnji urin: prilikom testiranja na polno prenosive bolesti.
• Krv: prilikom testiranja na TORCH infekciju, HIV, hepatitis.
• Cerebrospinalna tečnost: ako postoji sumnja na defekte u funkcionisanju centralnog nervnog sistema.
• Bris grla/ždrela: kod provjere na citomegalovirus, mononukleozu.
• Sputum/pleuralna tečnost: ako su pluća inficirana.
• Uzorci tkiva placente: da se isključi ili potvrdi intrauterina infekcija.

Priprema za isporuku

Prije doniranja biološkog materijala, pacijent mora pravilno pripremiti:

1. Ako se navedeni materijal ukloni iz uretre, seksualni odnosi i upotreba antibakterijskih sredstava za intimnu higijenu zabranjeni su 3 dana prije testa. 3 sata prije testiranja potrebno je suzdržati se od mokrenja.
2. Krv za istraživanje uzimajte rano ujutro na prazan stomak.
3. Za ispitivanje urina iskoristite prvu porciju nakon spavanja. Za ovu analizu pacijent prvo treba kupiti poseban spremnik u ljekarni. Preuzeti biomaterijal poželjno je dostaviti u dijagnostičku laboratoriju za dva sata.
4. Vaginalni bris bolje je uzeti par dana prije menstruacije, ili 1-2 dana nakon njenog završetka.
5. uzorak pljuvačke treba ukloniti tek nakon temeljnog ispiranja (3 puta) usnoj šupljini fiziološki rastvor.

Ako je moguće, treba uzeti biouzorak odmah odneti u laboratoriju.

Ako hitna dostava nije moguća, materijal se može pohraniti kratko vrijeme na hladnom mestu (+4…+8 C).

Ako je potrebno dugotrajno skladištenje neke vrste biomaterijala mogu se zamrznuti, ali samo jednom.

Kontejner mora biti u pratnji uput lekara za PCR.

Vrijeme PCR dijagnostike

Trajanje pripreme rezultata vrste ispitivanja koja se razmatra biće određena mogućnostima laboratorije u kojoj će se ono provoditi.

Često ide na dešifrovanje 1-2 dana. Međutim, u hitnim situacijama, PCR se može izvesti u roku od nekoliko sati.

Indikatori i interpretacija PCR rezultata

U toku primene kvalitativne tehnike PCR ispitivanja mogu se dobiti dva moguća odgovora:

• Pozitivno. Označava da je strana DNK/RNA prisutna u tijelu pacijenta, što znači da je došlo do infekcije. Ako pacijent nema nikakvih pritužbi, općenito se osjeća dobro, a rezultati PCR dijagnostike su pozitivni, to ukazuje na početnu fazu bolesti. U takvim situacijama liječenje neće oduzeti mnogo vremena i novca. U izuzetno rijetkim slučajevima, rezultat može biti lažno pozitivan: ako se krše pravila antisepse tijekom uzorkovanja biomaterijala.
• Negativno. Označava odsustvo željenih virusnih agenasa u uzetom uzorku. Lažno negativan rezultat može biti rezultat ljudskog faktora (prije svega, kršenje pravila za pohranjivanje biouzorka, njegovo netočno prikupljanje).

Kvantifikacija proučavanog biomaterijala omogućava izvođenje zaključaka o nivou opterećenja koje virusi/bakterije imaju na tijelo.

Prilikom dekodiranja određuje se broj stranih RNK ​​ili DNK, koji se koncentrišu u 1 ml. krv (IU/ml).

Zahvaljujući ovoj tehnici, lekar je u mogućnosti da prepozna stadijum i oblik bolesti, prepiše adekvatan tretman i odredi njegovo trajanje.

Reanalysisčesto se propisuje 1 mjesec nakon tretmana.

PCR dijagnostika - šta je to? Suština lančane reakcije polimeraze je u tome što se za proučavanje biološkog materijala koriste markeri posebne vrste, koji brzo analiziraju DNK infektivnih agenasa. U ginekologiji postoje različite metode PCR analiza kod žena, u zavisnosti od materijala koji se proučava (krv, urin, bris, itd.). Nakon obrade podataka, otkriva se vrsta patogena (ovo je tzv. "PCR kvalitativna analiza") i/ili njihova koncentracija - ova vrsta studije naziva se "PCR kvantitativna analiza".

Isporuka analiza PCR-om omogućava vam brzu provjeru patogena zarazne patologije kada to nije moguće učiniti drugim analizama (imunološka, ​​bakteriološka, ​​mikroskopska). U modernom laboratorijska dijagnostika PCR je najefikasniji i Najbolji način otkrivanje DNK mikroba i virusa. Test omogućava ginekologu i drugim liječnicima klinike ne samo da utvrde uzrok bolesti kod žena i muškaraca, već i da kontroliraju tok procesa, da ispravno procijene rezultat terapije.

Cijene PCR dijagnostike

ŠTA PCR POKAZUJE

Kvalitativna PCR analiza ukazuje na direktno prisustvo infektivnog agensa u ljudskom ili životinjskom tijelu. Možete proći i bris gotovo bilo koje lokalizacije (genitalni organi, uretra, orofarinks itd.), i PCR testove krvi. Brizom ili struganjem u ginekologiji provjeravaju na klamidiju, ureu- i mikoplazmu, herpes virus, HPV i druge mikrobe. Rezultat DNK analize se daje pacijentu uz zaključak laboratorije "otkriveno" ili "nije pronađeno". U slučaju krvnog testa, omogućava vam da identifikujete HIV, hepatitis, herpes, citomegalovirus i druge mikroorganizme u ranoj fazi, au nekim slučajevima i da odredite njihov genotip i pokazuje broj.

Kvantitativni PCR testovi.
Studija omogućava ne samo brzu identifikaciju željenog genetskog materijala, već i pokazivanje koncentracije njihove DNK (kvantitativna PCR metoda). Određivanje vrste i broja patogena važno je u odlučivanju da li se propisati liječenje, posebno ako se, na primjer, otkrije mikoplazma (kvantifikacija DNK), tipizacija ureaplazme (kvantifikacija DNK) ili, što je najvažnije, genotipizacija i kvantifikacija virusnog opterećenja mogu uraditi u analizama za HPV infekciju.

PCR REZULTATI

Iz svega rečenog jasno je šta je PCR analiza i koje su prednosti ovog testa u ginekologiji. Još jedna važna nijansa ove dijagnostike je da je dekodiranje rezultata dostupno i zgodno za neprofesionalca. S obzirom na to koliko se PCR analiza radi u ambulanti, kao i na vrijeme zaključka (laboratorija obično daje informacije za 1-2 dana), ova dijagnostička metoda postaje najbolji izbor za utvrđivanje svih većih ginekoloških i drugih infekcija.

Laboratorij, sa kvalitativnom metodom za provođenje DNK istraživanja na ženskim i muškim brisima, donosi zaključke dva tipa:

1. "PCR negativan" - nije pronađen patogen u testnom materijalu i
2. "PCR pozitivan" - u testu je pronađena RNK ili DNK mikroba ili virusa.

PCR u ginekologiji

Indikacije za polaganje ovih testova kod žena su sljedeće:

• Sumnja na mogućnost infekcije spolno prenosivim infekcijama;
• Anonimna anketa;
• Prisutnost sekreta iz genitalnog trakta, svrab;
• Bol u donjem dijelu trbuha;
• Nelagoda prilikom mokrenja;
• Bol tokom seksualnog odnosa;
• Povišeni leukociti u analizi razmaza na floru;
• Prisutnost erozije na grliću maternice;
• Planiranje trudnoće;
• Problemi sa začećem i rađanjem djeteta;
• Priprema za ginekološke operacije, IVF;
• U preventivne svrhe.

Gdje je najbolje mjesto za polaganje PCR testova u Moskvi?
Ova vrsta dijagnostike u ginekologiji odnosi se na moderne i visokotehnološke metode. PCR testove na infekcije treba raditi u klinici koja ima sve što je potrebno za dobijanje potpunih rezultata. U našem medicinskom centru materijal uzimaju kvalifikovani, iskusni ginekolozi (ne prosječno osoblje u sali za tretmane), koriste se jednokratni instrumenti i specijalni laboratorijski materijal, a uzorci primljeni od pacijenata svakodnevno se šalju na posao. Ovo omogućava ne samo brzo dobijanje PCR rezultata, već i osiguravanje njihove pouzdanosti. Po želji - potpuna anonimnost ankete.

Koliko košta PCR?
Ovu uslugu pružaju mnogi medicinske ustanove glavni gradovi. Na trošak utječu mnogi faktori, od lokacije do interne politike cijena. Međutim, postoje objektivni faktori koji određuju prosječnu minimalnu cifru ispod koje se zbog navedenih faktora ne može pružiti kvalitetna i pouzdana usluga. Cijena PCR dijagnostike u moskovskim klinikama za neke infekcije je u prosjeku sljedeća:

• kvalitativna analiza PCR razmaza - 400 - 500 rubalja;
• kvantitativna analiza PCR razmaza - od 600 rubalja (1 jedinica);
• Dijagnostika struganja RNA - od 1.000 rubalja (1 jedinica);
• PCR kvalitativni test krvi (na primjer, za herpes, HPV, Epstein-Barr virus, citomegalovirus) - 450 - 550 rubalja, kvantitativni - od 2.000 rubalja;
• Kvalitativna HIV DNK (poricanje / potvrda prisustva HIV-a u pretkliničkom periodu) - od 2.000 rubalja, kvantitativna RNK - od 7.000 rubalja, rezistencija - od 14.000 rubalja.

Priprema za PCR

Da bi dobile tačne, pouzdane rezultate istraživanja, djevojke i žene trebale bi se pridržavati određenih pravila prije odlaska na testiranje na infekcije:

1-2 dana prije posjete klinici radi testiranja, odbiti seksualni odnos;
- suzdržati se od mokrenja 1,5 - 2 sata prije brisa;
- obavljati higijenu vanjskih genitalija običnom vodom, bez deterdženata, isključiti ispiranje;
- isključiti upotrebu vaginalnih tableta, supozitorija;
- ne pravite PCR testove tokom menstruacije;
- Kako ste nevina, pre pregleda o tome unapred obavestite ginekologa.

Kako uzeti PCR testove

Polaganje PCR-a u našoj klinici, uključujući i anonimno, prilično je jednostavno. Zatim ćemo govoriti o tome kako se PCR uzima od žena i muškaraca i odakle, odakle je ova studija najinformativnija.

U slučaju žene, analizu uzima ginekolog. To se obično dešava na prvom pregledu kod lekara ili kada samo dođete da uradite testove na infekcije, bez prethodne konsultacije. Sve po vašoj želji. Izgovarate svoje želje, na koje infekcije želite da se testirate, a nakon toga direktno počinje postupak uzimanja materijala. Pacijent se svlači ispod struka, nalazi se na stolici. Nakon što je razdvojio male usne, doktor u vaginu ubacuje spekulum odgovarajuće veličine. Ginekolozi uzimaju PCR od žena, obično iz grlića materice, kao i iz uretre. U potonjem slučaju, prije uvođenja sonde, izvodi se kratkotrajna masaža uretre prstom umetnutim u vaginu. U slučaju da PCR analizu rade tinejdžerke ili djevice, tada se ogledalo ne koristi, već se uzorci sekreta uzimaju kroz rupu u himenu ili predvorju vagine. Dobijeni materijal se stavlja u zatvorenu epruvetu sa posebnim medijumom i šalje u laboratorij.

Uzimanje ove analize kod muškaraca nije posebno teško. Sonda se ubacuje u uretru na dubini od 3-4 cm, rotira nekoliko puta u smjeru kazaljke na satu i suprotno od kazaljke na satu. Materijal se takođe stavlja u epruvetu za dalju dijagnostiku.