Čo znamená metóda pcr. PCR diagnostika - analýza infekcií

Moderné metódy diagnostika chorôb sa neustále zdokonaľuje a dopĺňa o nové spôsoby získavania informácií o zdravotnom stave pacientov. Analýza PCR je uznávaná ako jeden z najpresnejších a najspoľahlivejších lekárskych testov. Tadiaľto laboratórny výskum bol patentovaný v roku 1983 a jeho tvorca Kary Mullis dostal za svoj objav Nobelovu cenu.

Na čo sa používa PCR?

Čo je to PCR? Polymerázová reťazová reakcia je špecifická štúdia, ktorú používajú lekári na celom svete. Mikrobiológia má množstvo informácií o štruktúre vírusov a baktérií, ktoré sú pôvodcami závažných ochorení. Ako štúdia sa používa PCR RNA vírusov, HSV protilátok atď.. Krvný test PCR pomáha identifikovať až 12 rôznych ochorení.

Každá štúdia môže byť vykonaná samostatne klinické indikácie. Existuje aj komplexné vyšetrenie, známe ako „PCR-12“. V tomto prípade sa vykonáva preventívna analýza pre každé ochorenie, ktoré dokáže PCR odhaliť.

• HCV RNA a iné typy hepatitídy
• Definícia pohlavne prenosných chorôb (chlamýdie, ureplazmóza, papilóm atď.)
• Infekčná mononukleóza (vírus Epstein-Barrovej)
• Herpes
• Onkovírusy (nádorové vírusy, ktoré spôsobujú rakovinu)
• CMVI (test na cytomegalovírus)
• Listerióza
• encefalitída
• Tuberkulóza
• Kandidóza (drozd)
• Infekcia Helicobacter pylori (vedie k žalúdočným problémom)

Lekárske inštitúcie niekedy vykonávajú takzvaný skríning, selektívnu štúdiu, ktorá je zameraná na geografickú oblasť alebo mestskú časť. Mnohé z týchto vyšetrení zabraňujú prepuknutiu vírusu. PCR a analyzátor chorôb sa používa na detekciu nákazlivých typov chorôb, ako je vírusová hepatitída.

Testy môžete absolvovať z vlastnej iniciatívy kontaktovaním miestneho terapeuta so žiadosťou o odporúčanie. Detekcia vírusovej DNA pre PCR nie je problém. Negatívny výsledok testu môže upokojiť aj podozrivého pacienta.

Vlastnosti analýzy

Krv na PCR môžete darovať na okresnej klinike alebo v súkromnom laboratóriu. Aby ste si vybrali, kde vykonať analýzu, mali by ste venovať pozornosť technickému vybaveniu zdravotníckeho zariadenia. Staré zariadenie môže výrazne znížiť spoľahlivosť analýzy. Vysoko kvalitný výskum môže spravidla zaručiť iba komerčná inštitúcia vybavená moderným laboratórnym vybavením.

Kvalitatívna analýza PCR je rýchlejšia a lacnejšia ako kvantitatívna. Avšak konečný výsledok kvantitatívneho testu poskytuje lekárovi viac informácií v prípade, že je pacient infikovaný. Akýkoľvek typ tejto štúdie je schopný zistiť prítomnosť ochorenia.

PCR počas latentného priebehu ochorenia je schopná detegovať vírus, a to aj pri absencii zjavných klinických symptómov a sťažností pacienta.

Výskum sa vykonáva v lekárskom laboratóriu. Ako chemické činidlo sa používajú špeciálne enzýmy, ktoré sú schopné zväčšiť štruktúry DNA a RNA biologickej vzorky pacienta. Táto metóda umožňuje laboratórnemu asistentovi vizuálne určiť prítomnosť škodlivých buniek. Získané údaje sa porovnajú s databázou infekčných agens a identifikuje sa choroba. Je tiež možné vypočítať kvantitatívny pomer patogénu.

Po odovzdaní biologickej vzorky laboratórny asistent uvedie čas testu a za koľko dní bude možné získať výsledok. Trvanie štúdie závisí od typu infekcie a môže byť 1 deň alebo môže trvať až 5 dní. Pripravenosť výsledku štúdie závisí od vybavenia a pracovného zaťaženia laboratória. PCR analýzu a interpretáciu výsledkov by mali vykonávať kvalifikovaní lekári.

Biomateriál pre výskum

Aby ste pochopili, ako prebieha analýza PCR, mali by ste vedieť, aký druh biologického materiálu sa má študovať. Najbežnejším spôsobom vykonania analýzy je krvný test zo žily. Vo väčšine prípadov nie je krvný test ovplyvnený vonkajšími faktormi, ako je strava alebo denný režim. Mnohí lekári však odporúčajú nepreťažovať organizmus a odber krvi odobrať nalačno. Antibakteriálne lieky môžu skresliť výsledok štúdie.

PCR diagnostika infekcií v gynekológii sa spravidla vykonáva pomocou náteru z povrchu sliznice. Ako sa odoberá vzorka? Náter odoberie ošetrujúci lekár po vyšetrení. Tampón sa umiestni do špeciálnej nádoby a prenesie sa do laboratória. Pre ženy existujú nasledujúce indikácie na analýzu steru: príčina neplodnosti, komplikácie počas tehotenstva, akútna forma pohlavne prenosných chorôb.

Na analýzu moču a stolice sa používajú špeciálne sterilné nádoby s vekom. Navyše nie je potrebné utierať alebo umývať zakúpené nádoby na analýzu. Počas odberu vzoriek sa nedotýkajte vnútorných stien nádoby rukami ani cudzími predmetmi. Dodatočné finančné prostriedky (klystíry atď.) sa neodporúčajú. Materiál by nemal obsahovať cudzie látky, preto sa odporúča týždeň pred testom prestať používať čapíky, laxatíva a diuretiká. Analýza sa vykonáva do 4-5 hodín a umožňuje identifikovať patogénne mikroorganizmy. Vysoká presnosť štúdie umožňuje odhaliť aj jednu patogénnu bunku v biologickej vzorke pacienta.

Ako urobiť analýzu

Krvný test na PCR sa odoberá z žily, v laboratórnych podmienkach, prísne na prázdny žalúdok. Dodanie ďalšieho biomateriálu sa uskutočňuje v laboratóriu, ordinácii ošetrujúceho lekára alebo doma. Kde odobrať vzorku na analýzu, vám pri odporúčaní povie ošetrujúci lekár. Pred dodaním biologickej vzorky je potrebná príprava pacienta. Všeobecná požiadavka je absencia fyzického a psycho-emocionálneho stresu na tele počas 2-3 dní pred testom. Ošetrujúci lekár vám povie, ako správne vykonať testy PCR.

Príprava na krvný test PCR zahŕňa vyhýbanie sa alkoholu 48 hodín pred odberom vzorky. Krv sa odoberá nalačno, pred testom je dovolené piť iba čistú vodu.

Ak sa súčasne vykonáva biochemická štúdia, potom sú pravidlá prípravy na štúdiu prísnejšie.

Mnoho pacientov sa zaujíma o otázku, či je možné vykonať testy počas menštruácie? Závisí to od biologickej vzorky. Po skončení menštruácie sa má urobiť gynekologický ster a vyšetrenie moču. Pre krv, sliny a iné vzorky menštruačný cyklusžien sa to netýka.

Rozbor moču a výkalov by sa mal robiť doma, darovaný materiál sa dodáva do laboratória v špeciálnej nádobe. Pred odovzdaním výkalov PCR by ste mali prestať užívať lieky, ktoré ovplyvňujú farbu výkalov. Deň pred odoslaním materiálu sa odporúča vylúčiť sexuálny kontakt, antibakteriálne lieky prestaňte užívať 2-3 týždne pred testom. Moč prechádza na prázdny žalúdok.

Výsledok výskumu

Váš lekár môže nariadiť kvalitatívny alebo kvantitatívny laboratórny test. Čo ukazuje analýza? Tento typ laboratórnej štúdie sa používa na diagnostiku infekčných a vírusových ochorení. Výsledok umožňuje lekárovi určiť, či je človek chorý alebo zdravý. Výsledky PCR sú vysoko presné a špecifické. Vo väčšine prípadov ide o jednoduchú negatívnu alebo pozitívnu odpoveď, ktorá je pochopiteľná aj pre človeka bez lekárskeho vzdelania. Existujú však niektoré funkcie dekódovania výsledku.

• Negatívna PCR znamená, že v testovanom materiáli sa nenašli žiadne stopy choroby.
• Kvalitatívna PCR ukazuje prítomnosť alebo neprítomnosť vírusov v biomateriáli, ale nie ich počet.
• Výsledok kvantitatívnej štúdie poskytuje informácie o počte vírusov prítomných v tele. Rovnaký test určuje fázu ochorenia (chronické, akútne, akútne).

Interpretáciu výsledkov vykonáva ošetrujúci lekár. V niektorých prípadoch pozitívna reakcia neznamená, že pacient je chorý. Možné je aj „zdravé“ prenášanie vírusu. Získanie falošne negatívneho výsledku je možné, ak infekcia už vstúpila do tela, ale ešte nezačala aktívnu infekciu. V 5% prípadov je výsledok analýzy chybný z dôvodu nedodržania odporúčaní zo strany pacienta na prípravu na štúdiu alebo chybných činností zamestnanca laboratória.

Výhody metódy

PCR je dnes najmodernejšia a najpresnejšia diagnostická metóda. Náklady na výskum sú pomerne vysoké. Veľké laboratóriá spravidla poskytujú zľavu na komplexné vyšetrenie.

Napríklad "PCR-12" na štúdium 12 rôznych parametrov bude stáť menej ako analýza pre každý z parametrov samostatne.

Analýza má oproti iným diagnostickým metódam množstvo nepopierateľných výhod:

• Určenie jedinečného úseku RNA reťazca infekcie umožňuje presne identifikovať pôvodcu ochorenia.
• Univerzálna metóda vykonávania štúdie umožňuje identifikovať niekoľko ochorení naraz v jednej biologickej vzorke pacienta.
• Test PCR je schopný určiť prítomnosť ochorenia ešte pred nástupom klinických príznakov a ťažkostí u pacienta, čo umožňuje čo najskôr začať liečbu.
• Metóda je vysoko citlivá. Test deteguje dokonca aj jednotlivé bunky patogénov.
• Neustále zlepšovanie spracovania biologických vzoriek každoročne zvyšuje kvalitu výskumu.

Analýza na PCR alebo polymerázovú reťazovú reakciu sa zvyčajne predpisuje pri zistení symptómov ochorenia alebo po kontakte s chorou osobou. Tento test je schopný preukázať prítomnosť vírusu, aj keď neexistujú žiadne príznaky ochorenia. Každá osoba, ktorá sa obrátila na terapeuta, môže prejsť touto jednoduchou a spoľahlivou analýzou. Interpretáciu analýzy PCR vykonáva kvalifikovaný lekár. Potvrdenie o neprítomnosti choroby môže byť platné niekoľko týždňov alebo mesiacov v závislosti od typu infekcie.

V kontakte s

Prvýkrát sa o analýze PCR diskutovalo v roku 1983. Túto techniku ​​vyvinul Cary Mullis a jeho laboratórni pracovníci. Odvtedy sa popularita štúdie neustále zvyšuje, pretože. Oproti iným metódam má značný počet výhod.

K dnešnému dňu je diagnostika PCR štandardom alebo štandardom pri zisťovaní infekcií a patogénov, najmä tých, ktoré sú asymptomatické. V prvom rade je to predklinická diagnostika.

Uskutočnenie analýzy v zariadení PCR

Podstata PCR analýzy spočíva v tom, že v skúmavke sú naklonované (násobne zvýšené) sekvencie nukleových kyselín (DNA alebo RNA) charakteristické pre konkrétny typ patogénov.

Skratka PCR znamená polymerázová reťazová reakcia.

Domov rozlišovacia črta tejto metódy je amplifikácia, t.j. tvorba obrovské číslo kópie požadovaného génu alebo jeho fragmentu. Toto všetko sa produkuje mimo tela, t.j. in vitro.

Ak sa teda vykoná 20 cyklov PCR, získa sa približne 1 milión kópií alebo viac. To umožňuje odhaliť infekciu aj pri jej malom množstve v zdrojovom materiáli, keď sú ostatné metódy analýzy bezmocné. To určuje vysokú citlivosť tejto metódy.

Jednoducho povedané, môžete nakresliť takúto analógiu - na podlahe si nevšimnete jedno malé zrnko piesku, ale po miliónovom zvýšení počtu zrniek piesku (PCR) už bude hromada piesku jasne viditeľná. .

Hlavné výhody analýzy infekcií metódou PCR sú:

• najvyššia citlivosť a špecifickosť v porovnaní s inými metódami používanými na detekciu infekčných agens;
• schopnosť detekovať mikroorganizmy v rôznych biologických materiáloch (krv, moč, vaginálny sekrét, sliny atď.);
• schopnosť súčasne identifikovať niekoľko príčinných mikroorganizmov, ak nejaké existujú. Pre porovnanie, použitie bakteriologických metód neposkytuje takúto príležitosť, pretože. na kultiváciu rôznych patogénnych mikróbov je potrebné použiť rôzne médiá;
• možnosť transportu biologického materiálu, pretože na identifikáciu patogénu nie je potrebné udržiavať ho nažive;
• rýchlosť analýzy;
• presnosť etiologickej diagnózy;
• možnosť kvantitatívneho stanovenia patogénov – dôležité najmä pre oportúnne mikróby, ktoré až po dosiahnutí určitej koncentrácie môžu spôsobiť ochorenie;
• schopnosť kontrolovať priebeh infekčného procesu počas liečby.

PCR analýza infekcií

V súčasnosti metóda polymerázovej reťazovej reakcie určuje väčšinu sexuálnych (a iných) infekčných chorôb. Diagnostika sa rozšírila vďaka vysokej citlivosti a špecifickosti.

PCR analýza na chlamýdie je obzvlášť populárna.

Je to spôsobené tým, že tieto mikroorganizmy žijú intracelulárne, čo spôsobuje určité ťažkosti pri ich detekcii.

PCR diagnostika umožňuje odhaliť aj minimálne množstvo chlamýdií, ktoré spravidla ešte nevedú k objaveniu sa klinických príznakov. Dokonca aj prítomnosť iba 2 molekúl nukleových kyselín v testovanom materiáli umožňuje identifikovať príčinnú infekciu.

A to je kľúčom k úspešnej liečbe, ktorá začína už v predklinickom štádiu.

Infekcie sú tiež identifikované:

• vírusová hepatitída;
• tuberkulóza;
• kliešťová encefalitída;
• rôzne pohlavné choroby atď.

PCR diagnostika umožňuje riešiť množstvo ďalších dôležitých úloh:

• monitorovanie terapie a hodnotenie jej účinnosti;
• stanovenie „záťaže vírusov“, na základe ktorej sa uskutočňuje individuálny výber dávky lieku;
• identifikácia kmeňov mikroorganizmov, ktoré sú farmakologicky rezistentné (necitlivosť na liečivá).

Príprava na odovzdanie analýzy

Účelová príprava na dodanie analýzy, ktorá sa vykoná pomocou PCR, nie je potrebná. Je však veľmi dôležité, aby odborník odobral materiál v súlade so všetkými potrebnými podmienkami sterility.

Takže napríklad na odber krvi by sa mali použiť špeciálne vákuové systémy, špeciálne skúmavky na odber tajomstva pohlavných orgánov atď.

V niektorých prípadoch musí byť materiál prevezený do laboratória. Aby ste to urobili správne, je potrebné hermeticky uzavrieť nádobu s biologickým materiálom. Tým sa zabráni prenikaniu ďalších mikroorganizmov žijúcich vo vonkajšom prostredí.

Výsledky analýzy PCR môžu mať dve možnosti:

• pozitívny - zistený patogén;
• negatívny - pôvodca nebol zistený.

Mali by ste vedieť - aj pri absencii klinických príznakov je možné dosiahnuť pozitívny výsledok.

V tomto prípade je potrebné zamerať sa na údaje polymerázovej reakcie, pretože umožňuje identifikovať ochorenie v predklinickom štádiu.

Niekedy je možné získať pochybnú odpoveď, keď počet identifikovaných kópií zodpovedá hornej hranici normy. Na objasnenie príčiny ochorenia je potrebné analýzu zopakovať, pričom treba venovať osobitnú pozornosť podmienkam odberu biologického materiálu.

Aká presná je diagnostika PCR?

Hlavné výhody PCR diagnostiky možno sformulovať do niekoľkých téz:

• možnosť získať obrovské množstvo kópií patogénnych mikroorganizmov;
• veľký počet kópií je kľúčom k úspešnému sekvenovaniu (detekcii).

To poskytuje vysoko presnú analýzu PCR na detekciu intracelulárnych patogénov a pomaly rastúcich mikroorganizmov.

Preto je metóda obzvlášť informatívna na detekciu mycobacterium tuberculosis a iných podobných infekčných agens. Má najvyššiu presnosť a nie je potrebné opätovne kontrolovať získané výsledky (okrem kazuistických prípadov).

Na získanie najspoľahlivejších výsledkov musia byť splnené dve hlavné podmienky, ktoré zabránia exogénnej (vonkajšej) infekcii:

• správny príjem materiálu;
• správna preprava.

PCR diagnostika(polymerázová reťazová reakcia) sa používa na zistenie aktívneho štádia ochorenia v kombinácii s už tradičnými štúdiami, kedy nedochádza k reakcii imunologickými a mikrobiologickými diagnostickými metódami.

Určité obdobie sa PCR diagnostika používala len na vedecké účely a až od konca 20. storočia a začiatku 21. storočia sa táto analýza stala akýmsi „zlatým štandardom“, ktorý je veľkým prínosom v rôznych oblastiach. medicíny.

Čo je podstatou diagnostiky PCR?

PCR diagnostika, na rozdiel od diagnostiky schopnej detekovať stopy protilátok (AT), zisťuje nielen základné príčiny patologického stavu, ale pomocou enzýmov v laboratóriu zisťuje aj prítomnosť DNA alebo RNA na špecifickom mieste.

PCR analýza je vysoko presná, eliminuje možnosť falošných reakcií a nie je potrebné odoberať krv zo žily na vyšetrenie, stačí malý počet vzoriek tkaniva, biologická tekutina.

K vyššie uvedenému variantu biologického prostredia materiálu na testovanie obsahujúceho údajný infekčný agens možno rozhodnutím lekára priradiť niekoľko možností naraz, vrátane:

• namazať(výtok z pohlavných orgánov);
• škrabanie zo sliznice(ústa, nos, pohlavné orgány);
• sliny spútum alebo pleurálna tekutina;
• šťava z prostatyštúdium sekrécie prostaty na prítomnosť škodcu;
• placentárne tkanivo alebo plodovej vody;
• všeobecný rozbor močuštudovať sediment (po centrifugácii), ak je to potrebné, na zistenie Mycobacterium tuberculosis;
• cerebrospinálny mok na detekciu infekčných lézií centrálneho nervového systému;
• zber buniek alebo tkanív(biopsia) z pečene, dvanástnika, žalúdka atď.

Tieto vzorky sa umiestnia do špeciálneho reaktora a analyzujú sa viacnásobným zdvojením (amplifikáciou) študovaných fragmentov DNA, opakovanými cyklami replikácie a denaturácie s pridaním špecifických enzýmov na syntézu. Podľa typu reťazovej reakcie táto metóda identifikuje typ a jednotlivé charakteristiky DNA alebo RNA. Nakoniec proces PCR komparatívna analýza klonovaný genetický materiál umožňuje identifikovať aj jednotlivé bunky živého vírusu, ľahko odlíšiť ureaplazmu od mykoplazmy resp.

Výhody a nevýhody diagnostiky PCR

Táto PCR diagnostika má výhody aj niekoľko nevýhod.

Výhody diagnostiky:

• definícia patogénu poskytuje priamy údaj o prítomnosti atypického úseku DNA alebo RNA v genetickom materiáli;
• PCR diagnostika poskytuje 100% presnosť vďaka prítomnosti častíc nukleovej kyseliny (fragmentov DNA alebo RNA) v testovanom materiáli charakteristických len pre špecifický vírus alebo baktériu;
• vysoká citlivosť systému PCR v porovnaní s inými diagnostickými metódami. PCR analýza na určenie prítomnosti patogénu je dostatočná pre jednu bunku živého vírusu (10-100 buniek vo vzorke), čo umožňuje odhaliť patogénny mikroorganizmus v ranom štádiu ochorenia pri absencii závažných symptómov a v pokročilých formách;
• high-tech automatizovaná PCR amplifikácia zvyšuje rýchlosť analýzy testovaním v deň odberu vzoriek (na diagnostiku sa vyčlení maximálne 4-6 hodín). To zvyšuje produktivitu a dáva prednosť kultúrnym metódam výskumu;
• všestrannosť analýzy umožňuje použitie genetického materiálu odobratej DNA alebo RNA rôzne možnosti na detekciu niekoľkých patogénov z jednej biologickej vzorky.

Keď už hovoríme o nevýhodách, potom vzhľadom na citlivosť systému PCR je jedným z nepríjemných momentov:

• variabilita mikroorganizmov. Nevýhodou je, že mutácia je vlastná mikroorganizmom, čo vedie k zmene študovaného genotypu patogénu. A testovací systém PCR v amplifikovanej oblasti genómu nedokáže zachytiť hybrid už vyvíjajúceho sa patogénu, rovnako ako ho ľudský imunitný systém nepozná, takže nedôjde k žiadnej reakcii na určenie prítomnosti infekčného ochorenia. Na tento účel však prebieha rôzny vývoj na zlepšenie metódy PCR;
• možnosť získať falošne pozitívny alebo falošne negatívny výsledok. Aby sa v jednej z fáz diagnostiky PCR nestretli s falošnými výsledkami, musí sa to robiť opatrne, bez porušenia procesu, pri dodržaní pravidiel zberu materiálu. Vzorky môžu zmeniť svoju štruktúru alebo sa dokonca rozpadnúť, čo môže viesť k falošne negatívnemu alebo falošne pozitívnemu výsledku. Malo by byť zrejmé, že takýto výsledok môže byť, keď už bola infekcia usmrtená, ale mŕtve bunky nemali čas na obnovu a boli zohľadnené počas klonovania. Preto na skoré dátumy po liečbe sa používajú iné metódy (napríklad) a po úplnom odstránení neaktívnych patogénov z tela sa vykoná analýza-kontrola pomocou PCR. A už ošetrujúci lekár akceptuje konečné rozhodnutie o vhodnosti terapie s prihliadnutím na všetky argumenty „za“ a „proti“.

Príprava na diagnostiku PCR a podmienky na testovanie

Stojí za to venovať pozornosť jednoduchej príprave na PCR, preto je potrebné prísne dodržiavať všetky odporúčania ošetrujúceho lekára a dodržať aspoň niekoľko nepopierateľných podmienok pre presnejší výsledok.

V závislosti od spôsobu odberu materiálu na vyšetrenie je potrebné pamätať na to, že:

• na diagnostiku s venóznou krvou pacient musí byť testovaný na lačný žalúdok, s vylúčením dokonca použitia tekutiny;
• dať podmaz je potrebné zdržať sa sexuálneho kontaktu aspoň na pár dní, je dovolené vykonávať hygienu pohlavných orgánov večer, ale nie v deň testu. Stojí za to vybrať optimálny čas na štúdium, berúc do úvahy: dva dni pred alebo po menštruačnom cykle;
• pre akúkoľvek metódu odberu vzoriek by mala prestať pár týždňov pred dodaním používať antibakteriálne lieky po predchádzajúcej konzultácii so svojím lekárom, pretože to môže ovplyvniť spoľahlivosť výsledku;
• na analýzu moču na zistenie prítomnosti patogénov je potrebné nielen dodržiavať sterilitu a hygienu, ale aj kvalitu zozbieraný materiál pre presnejší výskum. Preto je prijateľné počkať 2-3 hodiny od posledného močenia po odber moču, prípadne použiť rannú vzorku, ktorá dáva vyššiu pravdepodobnosť preukázania prítomnosti zápalového procesu.

Použitie PCR a zistené ochorenia

Pri pátraní po pôvodcoch mnohých chorôb by sa nemali ignorovať vyššie uvedené odporúčania a predpísané vyšetrenie lekárom pomocou diagnostickej metódy PCR môže ochrániť nielen dospelého, ale aj malé nenarodené dieťa v maternici pred vážnymi komplikáciami. .

Veď práve ženská polovica populácie najčastejšie trpí niektorými typmi vírusov (HPV), výrazne zvyšujúcich možnosť rakoviny krčka maternice či neplodnosti. A vzhľadom na možný negatívny vplyv na priebeh tehotenstva a na vývoj plodu je potrebné mať na pamäti, že rôzne skupiny mikroorganizmov prenášaných sexuálne alebo s imunodeficienciou je ťažké pripísať jednej alebo druhej skupine patogénu. , pretože sú veľmi vzájomne prepojené (napríklad infekcie TORCH a STI). Ale polymerázová reťazová reakcia je schopná nájsť cudziu štruktúru určením špecifického typu vírusovej DNA v ženskom tele.

Dešifrovanie výsledkov analýzy vám umožňuje potvrdiť alebo vyvrátiť prítomnosť chorôb. Takáto analýza, ktorá pokrýva široký rozsah patogénov, je veľmi dôležitá pre včasnú detekciu mnohých infekcií, ako sú:

• detekcia infekcie HIV. Ťažké poškodenie imunity infekciou, ktorá primárne postihuje imunokompetentné bunky prítomné na povrchu imunitného systému na CD4 receptoroch, ktoré následne strácajú schopnosť brániť sa infekciám a prestávajú reagovať na prítomnosť vírusovej RNA v krvnej plazme. Kedy pozitívny výsledok s anonymným vyšetrením sa opakuje s doplnením ďalších štúdií;
• vírusová hepatitída, najčastejšie hepatitída C(obsahuje patogén RNA), ktorý je pre svoju ľahkú toleranciu ťažko diagnostikovateľný inými metódami, pretože na rozpoznanie patogénu v krvi alebo biopsii pečene je optimálnejšia metóda PCR. sa prejavuje v neskorom štádiu a tvorí malígny zápalový proces. Je však potrebné zvážiť, že ak je výsledok počas testu na prítomnosť protilátok v krvi (AT) pozitívny a test PCR dáva negatívny výsledok, môže to naznačovať prítomnosť vírusu v tele vo veľmi nízke množstvo, alebo sú postihnuté bunky v štádiu čakania v genóme pečeňových buniek bez prístupu do krvného obehu. V takýchto prípadoch sa vykoná niekoľko opakovaných štúdií na konečnú diagnózu a liečebné metódy;
• onkogénne vírusy, ako je HPV(ľudský papilomavírus), ktorý má viac ako 100 rôznych typov vírusu, pohlavne prenosného alebo počas lekárskych zákrokov, novorodenec sa nakazí pôrodnými cestami od matky, ak je nosičom papilomavírusovej infekcie;
• STI(pohlavne prenosné infekcie);
• vhodné na detekciu všetkých pohlavne prenosných chorôb(, gardnerelóza,) a infekcie TORCH;
• označuje s vysokým stupňom presnosti s infekciou mononukleózou, charakterizované poškodením lymfatického a retikuloendoteliálneho systému (zväčšené lymfatické uzliny, slezina, pečeň), možno zistiť pomocou PCR diagnostiky, pričom sa ako testovací materiál odoberie krvné sérum. Podľa vonkajších parametrov sa Filatovova choroba môže prejaviť ako vyrážky, žlčovitosť kože, biely povlak na jazyku.
• , prenikanie do krvi pacientov s AIDS a príjemcov transplantovaných orgánov s použitím liekov na potlačenie imunitného systému;
• herpetická infekcia, predstavujúce jeden alebo iný typ herpesu, ktorý môže postihnúť pohlavné orgány, sliznicu očí alebo kožu;
• tuberkulóza. V prítomnosti hlavných príznakov ochorenia je po výsledkoch bronchoskopie predpísaná analýza PCR, ktorá vám umožní diagnostikovať aktívne štádium tuberkulózy oveľa rýchlejšie ako pri použití bakteriologickej alebo bakterioskopickej metódy;
• vírusové infekčné ochorenie ako napr kliešťová encefalitída(borelióza). Charakterizované poškodením buniek nervový systém, intoxikácia, zápal mozgu a následne rozvoj paralýzy. Na zistenie antigénu pomocou PCR diagnostiky sa odoberie krv a cerebrospinálny mok na izoláciu RNA vírusu.
• detekcia infekcie Helicobacter pylori(vedúce k chronickej gastritíde, peptickému vredu, nádorom žalúdka) pomocou PCR diagnostiky umožňuje detekovať DNA Helicobacter pylori (genetický materiál) v biopsii, stolici, slinách, rozlišovanie kmeňov podľa stupňa malignity.

PCR diagnostika infekcií sa vyvíja zrýchleným tempom a úspešne sa používa v onkológii, gynekológii, urológii, gastroenterológii, virológii a zoznam sa neustále aktualizuje, neobmedzuje sa však len na vyhľadávanie patogénov infekčných chorôb. Medzi ostatnými praktické aplikácie Metóda PCR môže tiež zdôrazniť využitie výskumu na určenie otcovstva a identifikáciu osoby.

Táto technika je známa svojou presnosťou a všestrannosťou. Pomocou PCR vyšetrenia možno v jednej vzorke zistiť súčasne viacero druhov škodlivých mikroorganizmov. Pri takýchto udalostiach sa môžu použiť rôzne biomateriály: sliny, moč, krv, pleurálna tekutina atď.

Na druhej strane si táto diagnóza vyžaduje moderné vybavenie a riadne vyškolený personál. Pri výbere lekárskej inštitúcie je lepšie zamerať sa na veľké inštitúcie, ktoré si môžu dovoliť nákup najnovších zariadení. To priamo ovplyvní rýchlosť dekódovania analýzy a jej presnosť.

Čo je to analýza PCR?

Celý súbor genetických informácií, ktoré má každý živý organizmus, je obsiahnutý v DNA. Špecifikovaná nukleová kyselina pozostáva zo štyroch zlúčenín. Nie je ťažké identifikovať živého tvora: každý z nich, bez ohľadu na parametre (či už je to baktéria, zviera, ryba), má svoju vlastnú jedinečnú DNA.

Niektoré mikroorganizmy uchovávajú svoju genetickú informáciu v RNA.

Fragmenty oboch nukleových kyselín (RNA a DNA) možno detegovať pomocou polymerázovej reťazovej reakcie, nazývanej aj PCR.

V srdci uvažovaného testovania - použitie špeciálnych enzýmov, vďaka čomu sa kopírujú niektoré úseky DNA / RNA vírusových, mikrobiálnych a iných infekcií.

Zdrojom týchto patogénov môže byť prakticky akýkoľvek biologický materiál odobraté človeku: sliny, krv, moč, výtok z močovej rúry alebo pošvy atď.

Keďže obsah nukleových kyselín vo vzorkách krvi a iných biologických materiáloch je veľmi nízky, nie je možné pomocou iných výskumných metód identifikovať konkrétne ochorenie. AT pri PCR je možné dosiahnuť zvýšenie hladiny molekúl DNA ktorý poskytuje spoľahlivú diagnostiku v budúcnosti.

Laboratórni technici používajú na vykonanie analýzy špeciálne vybavenie. cyklovač . Toto zariadenie ohrieva a ochladzuje skúmavky, v ktorých je biomateriál umiestnený. Primerané teplotné podmienky priamo ovplyvňujú presnosť získaných výsledkov.

V dôsledku toho dostávajú laboratórni asistenti PCR elektroforegram, na ktorom sú fixované fragmenty izolovaných nukleových kyselín.

Zadaný obrázok sa porovná s databázou v počítači – a tak sa určí typ patogénu, jeho koncentrácia v organizme.

Aké choroby možno identifikovať?

Pomocou uvažovanej analýzy možno identifikovať nasledujúce patológie:

K dnešnému dňu sa toto testovanie veľmi často uchyľuje. kriminalisti kedy je potrebné zistiť, komu patrí biologický materiál odobratý z miesta činu.

Na stanovenie možno použiť aj polymerázovú reťazovú reakciu otcovstvo.

Pravidlá zberu materiálu na výskum

Na získanie čo najpresnejšieho výsledku sa biologické vzorky na PCR odoberajú takto:

1. Náradie, nádoby na zaistený materiál je potrebné dezinfikovať. Je lepšie používať jednorazové zariadenia.
2. Odobraté vzorky krvi by sa mali umiestniť do skúmaviek, ktoré obsahujú antikoagulanciá. A v procese odberu vzoriek sa obracajú na špeciálne vákuové systémy.
3. Odber vzoriek akéhokoľvek biomateriálu sa musí vykonávať v manipulačnej miestnosti.

Na diagnostiku možno použiť rôzne materiály: všetko bude závisieť od typu infekcie:

• Výtery/škrabky z krčka maternice/uretry, ranný moč: pri testovaní na sexuálne prenosné choroby.
• Krv: pri testovaní na infekciu TORCH, HIV, hepatitídu.
• Cerebrospinálny mok: ak existuje podozrenie na poruchy fungovania centrálneho nervového systému.
• Výter z hrdla/hltanu: pri kontrole cytomegalovírusu, mononukleózy.
• Spútum/pleurálna tekutina: Ak sú pľúca infikované.
• Vzorky placentárneho tkaniva: na vylúčenie alebo potvrdenie vnútromaternicovej infekcie.

Príprava na doručenie

Pred darovaním biologických materiálov sa pacient musí správne pripraviť:

1. Ak je uvedený materiál odstránený z močovej trubice 3 dni pred testom je zakázaný pohlavný styk a používanie antibakteriálnych prostriedkov na intímnu hygienu. 3 hodiny pred testovaním sa musíte zdržať močenia.
2. Krv na výskum užite skoro ráno na lačný žalúdok.
3. Na testovanie moču užite jeho prvú časť po spánku. Na tento rozbor by si mal pacient najskôr v lekárni zakúpiť špeciálnu nádobu. Odobratý biomateriál je žiaduce doručiť do diagnostického laboratória do dvoch hodín.
4. Vaginálny výter je lepšie užívať pár dní pred menštruáciou alebo 1-2 dni po jej ukončení.
5. vzorka slín treba odstrániť až po dôkladnom opláchnutí (3x) ústna dutina fyziologický roztok.

Ak je to možné, mala by sa odobrať biologická vzorka okamžite odneste do laboratória.

Ak nie je možné urgentné doručenie, materiál je možné skladovať krátky čas na chladnom mieste (+4…+8 C).

Ak je potrebné dlhodobé skladovanie niektoré druhy biomateriálov možno zmraziť, ale iba raz.

Nádoba musí byť sprevádzaná odporúčanie lekára na PCR.

Načasovanie diagnostiky PCR

Trvanie prípravy výsledkov uvažovaného typu testovania bude určené možnosťami laboratória, v ktorom sa bude vykonávať.

často ide dešifrovať 1-2 dni. V núdzových situáciách je však možné vykonať PCR v priebehu niekoľkých hodín.

Indikátory a interpretácia výsledkov PCR

V priebehu aplikácie kvalitatívnej PCR vyšetrovacej techniky možno získať dve možné odpovede:

• Pozitívny. Označuje, že v tele pacienta je prítomná cudzia DNA/RNA, čo znamená, že došlo k infekcii. Ak pacient nemá žiadne sťažnosti, vo všeobecnosti sa cíti dobre a výsledky diagnostiky PCR sú pozitívne, naznačuje to počiatočné štádium ochorenia. V takýchto situáciách liečba nezaberie veľa času a peňazí. Vo veľmi zriedkavých prípadoch môže byť výsledok falošne pozitívny: ak sú počas odberu vzoriek biomateriálu porušené pravidlá antisepsy.
• Negatívne. Znamená neprítomnosť požadovaných vírusových činidiel v odobratej vzorke. Falošne negatívny výsledok môže byť výsledkom ľudského faktora (v prvom rade porušenie pravidiel pre uchovávanie biovzorky, jej nesprávny odber).

Kvantifikácia študovaného biomateriálu umožňuje vyvodiť závery o úrovni zaťaženia, ktoré vírusy / baktérie majú na telo.

Pri dekódovaní sa zisťuje počet cudzej RNA alebo DNA, ktoré sa koncentrujú v 1 ml. krvi (IU/ml).

Vďaka tejto technike je lekár schopný rozpoznať štádium a formu ochorenia, predpísať adekvátnu liečbu a určiť jej trvanie.

Reanalýzačasto predpisované 1 mesiac po liečbe.

PCR diagnostika - čo to je? Podstata polymerázovej reťazovej reakcie spočíva v tom, že na štúdium biologického materiálu sa používajú markery špeciálneho typu, ktoré rýchlo analyzujú DNA infekčných agens. V gynekológii existujú rôzne metódy analýzy PCR u žien v závislosti od skúmaného materiálu (krv, moč, stery atď.). Po spracovaní údajov sa deteguje typ patogénu (ide o tzv. „PCR kvalitatívna analýza“) a/alebo ich koncentrácia – tento typ štúdie sa nazýva „PCR kvantitatívna analýza“.

Dodávanie analýz pomocou PCR vám umožňuje rýchlo skontrolovať patogény infekčnej patológie, ak to nie je možné vykonať inými analýzami (imunologické, bakteriologické, mikroskopické). V modernom laboratórna diagnostika PCR je najúčinnejšia a Najlepšia cesta detekcia DNA mikróbov a vírusov. Test umožňuje gynekológovi a ostatným lekárom kliniky nielen určiť príčinu ochorenia u žien a mužov, ale aj kontrolovať priebeh procesu, správne posúdiť výsledok terapie.

Ceny za diagnostiku PCR

ČO UKÁŽE PCR

Kvalitatívna analýza PCR označuje priamu prítomnosť infekčného agens v ľudskom alebo zvieracom tele. Môžete prejsť ako náter takmer akejkoľvek lokalizácie (pohlavné orgány, močová trubica, orofarynx atď.), Ako aj krvné testy PCR. Náterom alebo škrabaním v gynekológii kontrolujú chlamýdie, močovinu a mykoplazmy, herpes vírus, HPV a iné mikróby. Výsledok analýzy DNA dostane pacient so záverom laboratória „zistený“ alebo „nenájdený“. V prípade krvného testu vám umožňuje identifikovať HIV, hepatitídu, herpes, cytomegalovírus a iné mikroorganizmy v počiatočnom štádiu av niektorých prípadoch určiť ich genotyp a ukazuje počet.

Kvantitatívne PCR testy.
Štúdia umožňuje nielen rýchlo identifikovať požadovaný genetický materiál, ale aj ukázať koncentráciu ich DNA (kvantitatívna metóda PCR). Určenie typu a počtu patogénov je dôležité pri rozhodovaní, či naordinovať liečbu, najmä ak sa zistí napríklad mykoplazma (kvantifikácia DNA), typizácia ureaplazmy (kvantifikácia DNA), alebo čo je najdôležitejšie, genotypizácia a kvantifikácia vírusovej záťaže vykonávať analýzy na HPV infekciu.

VÝSLEDKY PCR

Zo všetkého, čo bolo povedané, je zrejmé, čo je analýza PCR a aké sú výhody tohto testu v gynekológii. Ďalšou dôležitou nuansou tejto diagnostiky je, že dekódovanie výsledku je prístupné a pohodlné pre neprofesionála. Vzhľadom na to, koľko PCR analýzy sa robí na klinike, ako aj načasovanie záveru (laboratórium zvyčajne vydáva informáciu za 1-2 dni), sa táto diagnostická metóda stáva najlepšou voľbou na určenie všetkých závažných gynekologických a iných infekcií.

Laboratórium s kvalitatívnou metódou na vykonávanie výskumu DNA na ženských a mužských náteroch robí závery dvoch typov:

1. "PCR negatívna" - v testovanom materiáli nebol nájdený žiadny patogén a
2. "PCR pozitívna" - v teste bola nájdená RNA alebo DNA mikróbov alebo vírusov.

PCR v gynekológii

Indikácie na absolvovanie týchto testov u žien sú nasledovné:

• Podozrenie na možnosť infekcie pohlavne prenosnými chorobami;
• Anonymný prieskum;
• Prítomnosť sekrétov z genitálneho traktu, svrbenie;
• Bolesť v dolnej časti brucha;
• Nepohodlie pri močení;
• Bolesť pri pohlavnom styku;
• Zvýšené leukocyty v analýze náteru na flóru;
• Prítomnosť erózie na krčku maternice;
• Plánovanie tehotenstva;
• Problémy s počatím a nosením dieťaťa;
• Príprava na gynekologické operácie, IVF;
• Na preventívne účely.

Kde je najlepšie vykonať testy PCR v Moskve?
Tento typ diagnostiky v gynekológii sa vzťahuje na moderné a high-tech metódy. Testy PCR na infekcie by sa mali robiť na klinike, ktorá má všetko potrebné na získanie úplných výsledkov. V našom zdravotnom stredisku odoberajú materiál kvalifikovaní skúsení gynekológovia (nie priemerný personál v ošetrovni), používajú sa jednorazové prístroje a špeciálne laboratórne materiály a vzorky prijaté od pacientok sa posielajú denne do práce. To umožňuje nielen rýchlo získať výsledky PCR, ale aj zabezpečiť ich spoľahlivosť. Voliteľne - úplná anonymita prieskumu.

Koľko stojí PCR?
Túto službu poskytujú mnohí zdravotnícke zariadenia hlavné mestá. Náklady sú ovplyvnené mnohými faktormi, od miesta až po internú cenovú politiku. Existujú však objektívne faktory, ktoré určujú priemernú minimálnu hodnotu, pod ktorú nie je možné vzhľadom na uvedené faktory poskytnúť kvalitnú a spoľahlivú službu. Cena diagnostiky PCR na moskovských klinikách pre niektoré infekcie je v priemere nasledovná:

• kvalitatívna analýza náteru PCR - 400 - 500 rubľov;
• kvantitatívna analýza náteru PCR - od 600 rubľov (1 jednotka);
• Diagnostika škrabania RNA - od 1 000 rubľov (1 jednotka);
• Krvný test PCR kvalitatívny (napríklad na herpes, HPV, vírus Epstein-Barrovej, cytomegalovírus) - 450 - 550 rubľov, kvantitatívny - od 2 000 rubľov;
• HIV DNA kvalitatívna (odmietnutie / potvrdenie prítomnosti HIV v predklinickom období) - od 2 000 rubľov, kvantitatívna RNA - od 7 000 rubľov, rezistencia - od 14 000 rubľov.

Príprava na PCR

Na získanie správnych a spoľahlivých výsledkov výskumu by dievčatá a ženy mali pred testovaním na infekcie dodržiavať určité pravidlá:

1-2 dni pred návštevou kliniky na testovanie odmietnuť pohlavný styk;
- zdržať sa močenia 1,5 - 2 hodiny pred náterom;
- vykonávať hygienu vonkajších genitálií čistou vodou, bez čistiacich prostriedkov, vylúčiť sprchovanie;
- vylúčiť použitie vaginálnych tabliet, čapíkov;
- nerobte testy PCR počas menštruácie;
- Keďže ste panna, pred vyšetrením na to vopred upozornite gynekológa.

Ako vykonať testy PCR

Odovzdanie PCR na našej klinike, a to aj anonymne, je pomerne jednoduché. Ďalej si povieme, ako sa PCR odoberá od žien a mužov a odkiaľ, z ktorých miest je táto štúdia najinformatívnejšia.

V prípade ženy rozbor robí gynekológ. Zvyčajne sa to stane pri prvom stretnutí s lekárom alebo keď sa len dostavíte na testy na infekcie bez predchádzajúcej konzultácie. Všetko podľa vášho želania. Vyslovíte svoje želanie, na aké infekcie by ste sa chceli dať otestovať, a potom už priamo začína procedúra odberu materiálu. Pacient sa vyzlieka pod pás, nachádza sa na stoličke. Po oddelení malých pyskov ohanbia lekár vloží do vagíny zrkadlo vhodnej veľkosti. Gynekológovia odoberajú PCR od žien, zvyčajne z krčka maternice, ako aj z močovej trubice. V druhom prípade sa pred zavedením sondy vykoná krátkodobá masáž močovej rúry prstom zasunutým do pošvy. V prípade, že analýzu PCR vykonávajú dospievajúce dievčatá alebo panny, zrkadlo sa nepoužíva a vzorky sekrétov sa odoberajú cez otvor v panenskej blane alebo v predsieni vagíny. Výsledný materiál sa umiestni do zapečatenej skúmavky so špeciálnym médiom a odošle sa do laboratória.

Uskutočniť túto analýzu u mužov nie je obzvlášť ťažké. Sonda sa zavedie do močovej trubice v hĺbke 3-4 cm, niekoľkokrát sa otočí v smere a proti smeru hodinových ručičiek. Materiál sa tiež umiestni do skúmavky na ďalšiu diagnostiku.